Productes

La millora de la utilització del nitrogen en el bestiar és important per garantir una producció de bestiar sostenible.Com que les purines i les pirimidines (PP) constitueixen una part apreciable del nitrogen del rumen, és essencial una millor comprensió de l'absorció i el metabolisme intermediari del PP.El present treball descriu el desenvolupament i validació d'un mètode sensible i específic per a la determinació simultània de 20 purines (adenina, guanina, guanosina, inosina, 2'-desoxiguanosina, 2'-desoxiinosina, xantina, hipoxantina), pirimidines (citosina, timina, uracil, citidina, uridina, timidina, 2'-desoxiuridina) i els seus productes de degradació (àcid úric, alantoïna, β-alanina, àcid β-ureidopropiònic, àcid β-aminoisobutíric) al plasma sanguini de vaques lleteres.La tècnica basada en cromatografia líquida d'alt rendiment acoblada a l'espectrometria de masses en tàndem d'ionització electrospray (LC-MS/MS) es va combinar amb estàndards de calibratge individuals coincidents amb matrius i compostos de referència estables marcats isotòpicament.L'anàlisi quantitativa va ser precedida d'un nou procediment de pretractament que consistia en precipitació d'etanol, filtració, evaporació i reconstitució.Es van investigar els paràmetres de separació i detecció durant l'anàlisi LC-MS/MS.Es va confirmar que l'ús d'un model de calibració logarítmica en lloc d'un model de calibratge lineal va donar lloc a un CV% més baix i una prova de manca d'ajust va demostrar una regressió lineal satisfactòria.El mètode cobreix els intervals de concentració de cada metabòlit segons el de les mostres reals, per exemple, guanina: 0,10-5,0 μmol/L, i alantoïna: 120-500 μmol/L.El CV% per als intervals de quantificació escollits era inferior al 25%.El mètode té una bona repetibilitat (CV%≤25%) i precisió intermèdia (CV%≤25%) i excel·lents recuperacions (91-107%).Tots els metabòlits van demostrar una bona estabilitat a llarg termini i una bona estabilitat dins de les tirades (CV% ≤10%).Es van observar diferents graus d'efectes de matriu absoluts en plasma, orina i llet.La determinació dels efectes de la matriu relativa va revelar que el mètode era adequat per a gairebé tots els metabòlits de PP examinats en plasma extret d'una artèria i de les venes hepàtiques portal, hepàtiques i gastroesplèniques i, amb poques excepcions, també per a altres espècies com el pollastre, el porc, visó, humà i rata.