Productes

La proteïna ORF45 de l'herpesvirus associat al sarcoma de Kaposi (KSHV) és una proteïna del tegument immediat i precoç específica del gammaherpesvirus.Els nostres estudis anteriors han revelat els seus papers crucials tant en les etapes primerenques com tardanes de la infecció per KSHV.En aquest estudi, vam estudiar l'interatoma d'ORF45 mitjançant un panell d'anticossos monoclonals.A més de les proteïnes de cinasa regulada extracel·lular (ERK) i p90 ribosòmica S6 cinasa (RSK) identificades anteriorment, vam trobar diverses altres proteïnes copurificades, incloses les destacades de ∼ 38 kDa i ∼ 130 kDa.L'espectrometria de masses va revelar que la proteïna de 38 kDa és ORF33 viral i la proteïna de 130 kDa és la USP7 cel·lular (proteasa 7 específica de la ubiquitina).Vam cartografiar el domini d'unió a ORF33 als 19 aminoàcids carboxil-terminals altament conservats (aa) d'ORF45 i al domini d'unió a USP7 al motiu de consens reportat a la regió central d'ORF45.Utilitzant la tinció d'immunofluorescència, vam observar la colocalització d'ORF45 amb ORF33 o USP7 tant en condicions transfectades com en cèl·lules infectades per KSHV.A més, vam observar la relocalització depenent d'ORF45 d'una porció d'ORF33/USP7 des del nucli fins al citoplasma.Vam trobar que ORF45 va provocar un augment de l'acumulació de proteïnes ORF33 que es va abolir si s'eliminava el domini d'unió a ORF33 o USP7 a ORF45.A més, la supressió de l'extrem carboxil conservat d'ORF45 al genoma KSHV va reduir dràsticament el nivell de proteïna ORF33 a les cèl·lules infectades per KSHV i va abolir la producció de virions descendents.Col·lectivament, els nostres resultats no només revelen nous components de l'interatoma ORF45, sinó que també demostren que les interaccions entre aquestes proteïnes són crucials per a la replicació lítica del KSHV. L'herpesvirus associat al sarcoma de Kaposi (KSHV) és l'agent causant de diversos càncers humans.KSHV ORF45 és una proteïna multifuncional que es requereix per a la replicació lítica de KSHV, però els mecanismes exactes pels quals ORF45 realitza les seves funcions crítiques no estan clars.Els nostres estudis anteriors van revelar que tota la proteïna ORF45 de les cèl·lules existeix en complexos d'alt pes molecular.Per tant, hem intentat caracteritzar l'interatoma d'ORF45 per proporcionar informació sobre els seus papers durant la replicació lítica.Utilitzant un panell d'anticossos monoclonals, vam estudiar l'interatoma ORF45 en cèl·lules infectades per KSHV.Hem identificat dos nous socis d'unió d'ORF45: la proteïna viral ORF33 i la proteasa 7 específica de la ubiquitina cel·lular (USP7).Demostrem a més que la interacció entre ORF45 i ORF33 és crucial per a la producció eficient de partícules virals de KSHV, cosa que suggereix que la interferència dirigida amb aquesta interacció pot representar una nova estratègia per inhibir la replicació lítica de KSHV.