Productes

Monogalactopiranòsids de fluoresceïna i èster metílic de fluoresceïna: síntesi, hidròlisi enzimàtica per β-galactosidasa biotinilada i determinació del coeficient de difusió de traducció

Els monoglicòsids de fluoresceïna (d-galactopiranòsid (FMG) i d-glucopiranòsid) i el seu èster metílic (MFMG) s'han preparat a partir d'acetobromoglucosa/galactosa i èster metílic de fluoresceïna amb bons rendiments.S'han realitzat experiments d'hidròlisi enzimàtica (utilitzant β-galactosidasa biotinilada) dels derivats del galacto i s'han calculat els paràmetres cinètics.S'ha observat un augment de 15 a 20 vegades de la intensitat de fluorescència durant la hidròlisi.S'ha observat un augment lineal de la fluorescència en poc temps i baixa concentració de substrat, fent que aquests compostos siguin sondes útils i sensibles per a les galactosidases.La magnitud del valor de la constant de Michaelis-Menten (Km) per a MFMG és superior a la de FMG, cosa que suggereix un possible canvi conformacional del substrat fluorogènic.El valor Km de β-Gal biotinilat amb FMG és inferior al de l'enzim natiu.Aquesta observació indica una afinitat de substrat més alta de l'enzim biotinilat en comparació amb l'enzim natiu.S'han mesurat els coeficients de difusió translacional, tant per als substrats fluorogènics com per als dos productes, utilitzant espectroscòpia de correlació de fluorescència.S'ha mesurat que els coeficients de difusió translacional dels substrats fluorogènics i dels productes d'hidròlisi enzimàtica són similars, en el rang de 3,5–4,5 × 10−10 m2 s−1.Així, una millora o retard de la cinètica enzimàtica a causa de la diferència en la mobilitat translacional del substrat i del producte no és tan evident.