Productes

La topologia de membrana del domini del canal de colicina E1 es va estudiar mitjançant la transferència d'energia de ressonància de fluorescència (FRET).El FRET va implicar un aminoàcid fluorescent codificat genèticament (cumarina) com a donant i un residu de cisteïna marcat selectivament lligat amb DABMI (4-(dimetilamino)fenilazofenil-4'-maleimida) com a acceptor de FRET.El residu de cumarina fluorescent es va incorporar a la proteïna mitjançant un parell ortogonal d'ARNt/aminoacil-ARNt sintetasa que va permetre la incorporació selectiva a qualsevol lloc dins del domini del canal de colicina.Cada variant contenia una mutació de parada (TAG) per a la incorporació de cumarina i una mutació de cisteïna (TGT) per a la fixació de DABMI.Es van determinar sis distàncies interhelicals dins de les hèlixs 1-6 mitjançant l'anàlisi FRET tant per als estats solubles com per a la membrana.Les dades de FRET van mostrar grans canvis en les distàncies interhelicals entre les hèlixs 3-6 després de l'associació de la membrana, proporcionant una nova visió de l'estructura lligada a la membrana del domini del canal.En general, les eficiències interhelicals de la cumarina-DABMI FRET van disminuir amb la unió a la membrana, basant-se en el model de paraigua per al canal de la colicina.Es va desenvolupar un model provisional per a l'estat tancat del domini del canal basat en les dades de FRET actuals i publicades anteriorment.El model suggereix una disposició circular de les hèlixs 1-7 en el sentit de les agulles del rellotge des del costat extracel·lular i l'associació interfacial de membrana de les hèlixs 1, 6, 7 i 10 al voltant de la forquilla transmembrana central formada per les hèlixs 8 i 9.