Productes

Les cèl·lules eucariotes contenen un delicat equilibri de quantitats minúscules dels quatre desoxiribonucleòsids trifosfats (dNTP), suficients només per a uns minuts de replicació de l'ADN.Tant una deficiència com un excedent d'un únic dNTP poden provocar un augment de les taxes de mutació, una reparació defectuosa de l'ADN o l'esgotament de l'ADN mitocondrial.Els dNTP solen quantificar-se mitjançant un assaig enzimàtic en què la incorporació de dATP radioactiu (o dTTP radioactiu en l'assaig de dATP) en oligonucleòtids sintètics específics per part d'una ADN polimerasa és proporcional a la concentració del dNTP desconegut.Trobem que l'ADN polimerasa de Klenow que s'utilitza habitualment pot substituir el ribonucleòtid corresponent pel dNTP desconegut que condueix en alguns casos a una gran sobreestimació dels dNTP.Ara descrivim les condicions d'assaig per a cada dNTP que eviten la incorporació de ribonucleòtids.Per als assajos dTTP i dATP n'hi ha prou amb minimitzar les concentracions de l'enzim Klenow i de dATP (o dTTP) marcat;per a dCTP i dGTP hem hagut de substituir l'enzim Klenow per l'ADN polimerasa Taq o la termosequenasa.Suggerim que en alguns informes anteriors la incorporació de ribonucleòtids pot haver provocat valors massa alts per a dGTP i dCTP.