Productes

La fosforilació de proteïnes regula diverses funcions cel·lulars i té un paper clau en el desenvolupament primerenc de les plantes.Per complementar i ampliar les investigacions prèvies de fosforilació de proteïnes en plàntules d'Arabidopsis, hem utilitzat un enfocament alternatiu que combina l'extracció de proteïnes en condicions no desnaturalitzants amb l'enriquiment de la cromatografia d'afinitat d'ions metàl·lics immobilitzats (IMAC) de fosfoproteïnes intactes en extractes esgotats amb Rubisco, seguida de la identificació. utilitzant electroforesi en gel bidimensional (2-DE) i cromatografia líquida-espectrometria de masses en tàndem (LC-MS/MS).La digestió de tripsina en gel i l'anàlisi de taques de gel seleccionades van identificar 144 pèptids i residus fosforilats, dels quals només es van trobar 18 fosfopèptids i 8 fosfosits a les bases de dades de llocs de fosforilació de PhosPhAt 4.0 i P3DB Arabidopsis thaliana.Més de la meitat de les 82 fosfoproteïnes identificades estaven implicades en el metabolisme dels carbohidrats, la fotosíntesi/respiració o els mecanismes de resposta a l'estrès oxidatiu.L'enriquiment de fosfoproteïnes intactes abans de 2-DE i LC-MS/MS sembla millorar la detecció de residus de treonina i tirosina fosforilats en comparació amb mètodes que utilitzen l'enriquiment a nivell de pèptids, cosa que suggereix que els dos enfocaments són una mica complementaris pel que fa a la cobertura del lloc de fosforilació.En comparar els resultats de les plàntules joves amb els obtinguts prèviament per a les fulles madures d'Arabidopsis, es va identificar cinc proteïnes fosforilates diferencialment en aquests teixits, demostrant el potencial d'aquesta tècnica per investigar la dinàmica de la fosforilació de proteïnes durant el desenvolupament de les plantes.