Productes

X-gal (també abreujat BCIG per 5-bromo-4-cloro-3-indolil-β-D-galactopiranòsid) és un compost orgànic format per galactosa lligada a un indol substituït.El compost va ser sintetitzat per Jerome Horwitz i col·laboradors el 1964. El nom químic formal s'escurça sovint a frases menys precises però també menys feixugues, com ara bromocloroindoxyl galactoside.L'X d'indoxyl pot ser la font de l'X en la contracció X-gal.X-gal s'utilitza sovint en biologia molecular per provar la presència d'un enzim, la β-galactosidasa, en lloc del seu objectiu habitual, un β-galactosid.També s'utilitza per detectar l'activitat d'aquest enzim en histoquímica i bacteriologia.X-gal és un dels molts glicòsids i èsters d'indòxil que produeixen compostos blaus insolubles similars al colorant indigo com a resultat de la hidròlisi catalitzada per enzims.

X-gal és un anàleg de la lactosa i, per tant, pot ser hidrolitzat per l'enzim β-galactosidasa que escinda l'enllaç β-glicosídic de la D-lactosa.X-gal, quan es divideix per la β-galactosidasa, produeix galactosa i 5-bromo-4-cloro-3-hidroxiindol - 1. Aquest últim es dimeritza espontàniament i s'oxida en 5,5'-dibromo-4,4'-dicloro -índigo - 2, un producte d'un blau intens que és insoluble.X-gal en si és incolor, de manera que la presència de producte de color blau es pot utilitzar com a prova de la presència de β-galactosidasa activa.Això també permet que la β-galactosidasa bacteriana (anomenada lacZ) s'utilitzi com a reporter en diverses aplicacions.

En l'anàlisi de dos híbrids, la β-galactosidasa es pot utilitzar com a reporter per identificar proteïnes que interaccionen entre elles.En aquest mètode, les biblioteques de genoma es poden examinar per a la interacció de proteïnes mitjançant llevats o sistema bacterià.Quan hi ha una interacció exitosa entre les proteïnes que s'estan examinant, es produirà la unió d'un domini d'activació a un promotor.Si el promotor està vinculat a un gen lacZ, la producció de β-galactosidasa, que dóna lloc a la formació de colònies pigmentades de blau en presència de X-gal, indicarà, per tant, una interacció exitosa entre proteïnes.Aquesta tècnica es pot limitar a les biblioteques de cribratge de mida inferior al voltant de 106. La divisió reeixida de X-gal també crea una olor notablement desagradable a causa de la volatilització de l'indol.

Com que X-gal en si és incolor, la presència de producte de color blau es pot utilitzar com a prova de la presència d'una β-galactosidasa activa.

Aquesta fàcil identificació d'un enzim actiu permet que el gen de la βgalactosidasa (el gen lacZ) s'utilitzi com a gen reporter en diverses aplicacions.