Productes

De manera similar a altres virus d'ARN de cadena positiva, els tombusvirus es repliquen pel complex de replicasa viral unida a la membrana (VRC).El VRC consta de l'ARN polimerasa depenent de l'ARN codificada pel virus p92 (RdRp), la chaperona d'ARN p33 viral i diverses proteïnes hoste cooptades.Per esdevenir un RdRp funcional després de la seva traducció, la proteïna de replicació p92 s'ha d'incorporar al VRC, seguida de la seva activació.Prèviament hem demostrat en un assaig basat en extracte de llevat lliure de cèl·lules que l'activació del RdRp del virus del tomàquet bushy stunt (TBSV) requereix un(s) factor(s) hoste soluble.En aquest article, identifiquem la proteïna de xoc tèrmic cel·lular 70 (Hsp70) com el factor hoste cooptat necessari per a l'activació d'un TBSV RdRp recombinant truncat a l'N-terminal.A més, el bloqueig de la funció Hsp70 basat en molècules petites inhibeix la síntesi d'ARN pel tombusvirus RdRp in vitro.A més, mostrem que els fosfolípids neutres, és a dir, la fosfatidiletanolamina (PE) i la fosfatidilcolina (PC), milloren l'activació de RdRp in vitro.En canvi, el fosfatidilglicerol (PG) mostra un efecte inhibidor fort i dominant sobre l'activació de RdRp in vitro.També demostrem que PE i PC estimulen la interacció RdRp-viral més cadena RNA [(+)RNA], mentre que PG inhibeix la unió de l'ARN viral a RdRp.A partir dels papers estimuladors versus inhibidors de diversos fosfolípids en l'activació de RdRp de tombusvirus, proposem que els tombusvirus puguin utilitzar la composició lipídica de les membranes subcel·lulars dirigides per regular el nou muntatge de VRC durant el curs de la infecció. L'ARN polimerasa depenent de l'ARN codificada pel virus. (RdRp), que s'encarrega de sintetitzar la descendència de l'ARN viral en cèl·lules infectades de diversos virus d'ARN de cadena positiva, està inicialment inactiu.És probable que aquesta estratègia eviti la síntesi d'ARN viral al citosol que conduiria ràpidament a la inducció de respostes antivirals cel·lulars provocades per l'ARN.Durant el muntatge del complex de replicasa unit a la membrana, el RdRp viral s'activa mitjançant un procés incompletament entès que fa que el RdRp sigui capaç de síntesi d'ARN.Mitjançant l'ús de TBSV RdRp, mostrem que la chaperona cel·lular Hsp70 cooptada i els fosfolípids neutres faciliten l'activació de RdRp in vitro.En canvi, el fosfatidilglicerol (PG) té un efecte inhibidor dominant sobre l'activació de RdRp in vitro i la interacció RdRp-ARN viral, cosa que suggereix que el microdomini membranós que envolta el RdRp afecta molt la seva capacitat per a la síntesi d'ARN.Per tant, l'activació de la RdRp viral probablement depèn de múltiples components hoste a les cèl·lules infectades.