Productes

Les vies moleculars patògenes en malalties hepàtiques cirròtiques com el virus de l'hepatitis C (VHC), l'hepatitis autoimmune (AIH) i la cirrosi biliar primària (CBP) estan poc caracteritzades.Els gens expressats de manera diferent són sovint importants en la patogènesi de la malaltia.La hibridació subtractiva de supressió (SSH) és un enfocament a tot el genoma que enriqueix les transcripcions d'ARNm expressades de manera diferent.L'objectiu és fer noves observacions de l'expressió gènica diferencial en la cirrosi mitjançant SSH combinat amb la reacció en cadena de la polimerasa de la transcriptasa inversa quantitativa en temps real (RT-PCR).SSH es van examinar els transcriptomes hepàtics de la cirrosi del VHC, la cirrosi AIH, la PBC i el teixit hepàtic no malalt.Els clons d'ADN complementari (ADNc) resultants es van tornar a seleccionar per a l'expressió diferencial mitjançant hibridació dot-blot i després es van seqüenciar.L'expressió gènica seleccionada es va quantificar mitjançant RT-PCR en temps real.Després de SSH, es van tornar a examinar 694 clons per a l'expressió gènica diferencial, dels quals 145 es van seqüenciar i es va trobar que derivaven de 89 gens diferents.Set clons només eren homòlegs amb seqüències d'etiquetes de seqüència expressada (EST) que codificaven gens que no tenien cap funció coneguda.L'expressió regulada a l'alça de quatre gens es va confirmar mitjançant RT-PCR en temps real: membre 3 de la superfamília transmembrana 4 (tetraspanina CO-029) en totes les formes de cirrosi, proteïna que interacciona amb eriçó (HIP) en cirrosi AIH i quitinasa 3-like-1 (HC gp-39 o ykl-40) i repetició d'àcid arginina-glutàmic (RERE) en la cirrosi del VHC.Es van observar polimorfismes del gen RERE i variants d'empalmament en tots els teixits examinats.La regulació de la tetraspanina CO-029 es va localitzar principalment a les cèl·lules ductulars biliars.En conclusió, es van fer noves observacions de l'expressió gènica diferencial en la cirrosi humana utilitzant SSH com a eina de descobriment principal.En particular, es garanteixen estudis addicionals del gen RERE i dels seus productes en la malaltia hepàtica associada al VHC.