Productes

La manera com els efectes de les mutacions simultànies es combinen per canviar l'activitat enzimàtica no és fàcil de preveure perquè aquests efectes no sempre són additius de manera lineal.Per tant, la caracterització dels efectes de mutacions simultànies de residus d'aminoàcids que s'uneixen al substrat pot fer una contribució significativa a la comprensió de l'especificitat del substrat dels enzims.A la beta-glicosidasa de Spodoptera frugiperda (Sfbetagly), els dos residus Q39 i E451 interaccionen amb el substrat i això és essencial per definir l'especificitat del substrat.Els mutants dobles de Sfbetagly (A451E39, S451E39 i S451N39) es van preparar mitjançant mutagènesi dirigida al lloc, expressats en bacteris i purificats mitjançant cromatografia d'afinitat.Aquests enzims es van caracteritzar utilitzant p-nitrofenil beta-galactòsid i p-nitrofenil beta-fucòsid com a substrats.La relació k cat/Km per a mutants simples i dobles de Sfbetagly que contenen mutacions dirigides al lloc a les posicions Q39 i E451 es va utilitzar per demostrar que l'efecte sobre l'energia lliure de ESdouble daga (complex d'estat de transició enzimàtica) de les mutacions dobles (Gdouble). daggerxy) no és la suma dels efectes resultants de les mutacions individuals (Gdouble daggerx i Gdouble daggery).Aquesta diferència en Gdouble daga indica que els efectes de les mutacions individuals se superposen parcialment.Per tant, aquest efecte comú només compta una vegada a Gdouble daggerxy.Les dades cristal·logràfiques de les beta-glicosidases revelen la presència d'un enllaç d'hidrogen bidentat que implica els residus Q39 i E451 i el mateix grup hidroxil del substrat.Per tant, tant les dades termodinàmiques com les cristal·logràfiques suggereixen que els residus Q39 i E451 exerceixen una influència mútua en les seves respectives interaccions amb el substrat.