Productes

Coneixements mecànics sobre una família d'alfa-mannosidases depenent de Ca2+ en un simbiont intestinal humà.

Els bacteris colònics, exemplificats per Bacteroides thetaiotaomicron, tenen un paper clau en el manteniment de la salut humana mitjançant l'aprofitament de grans famílies d'hidrolases de glicòsids (GHs) per explotar polisacàrids dietètics i glicans hostes com a nutrients.Aquesta expansió de la família GH s'exemplifica amb les 23 glicosidases de la família GH92 codificades pel genoma de B. thetaiotaomicron.Aquí mostrem que es tracta d'alfa-mannosidases que actuen mitjançant un únic mecanisme de desplaçament per utilitzar N-glicans hoste.L'estructura tridimensional de dues manosidases GH92 defineix una família de proteïnes de dos dominis en què el centre catalític es troba a la interfície del domini, proporcionant assistència àcida (glutamat) i base (aspartat) a la hidròlisi en un Ca(2+)- manera dependent.Les estructures tridimensionals dels GH92 en complex amb inhibidors proporcionen una visió de l'especificitat, el mecanisme i l'itinerari conformacional de la catàlisi.El Ca(2+) té un paper catalitzador clau per ajudar a distorsionar el manòsid lluny de la conformació de la cadira d'estat fonamental (4)C(1) cap a l'estat de transició.（Bibliografia: Nat.Chem.Biol.6, 125-32, (2010)

Cromatografia d'afinitat frontal de glicoasparagines d'ovalbúmina en una columna de concanavalina A-sefarosa.Estudi quantitatiu de l'especificitat d'unió de la lectina.

Les interaccions de la concanavalina A (ConA) immobilitzada amb Sepharose 4B amb 10 glicoasparagines derivades de l'ovalbúmina es van investigar quantitativament mitjançant cromatografia d'afinitat frontal.En aquest mètode, s'aplica una solució d'hidrats de carboni contínuament a una columna ConA-Sepharose i es mesura el retard del front d'elució com a paràmetre de la força de la interacció.Es pot determinar la constant de dissociació (Kd) de cada saccàrid amb ConA.Una anàlisi de la unió de p-nitrofenil-alfa,D-manòsid ha demostrat que les propietats d'unió de ConA no canvien essencialment després de la immobilització a Sepharose 4B.Cadascuna de les glicoasparagines d'ovalbúmina es va etiquetar amb triti pel mètode de metilació reductora per a l'anàlisi.Una comparació dels valors de Kd obtinguts va mostrar que la unió de ConA varia considerablement amb diferències estructurals molt lleugeres de la cadena de glicosil.Els resultats suggereixen que ConA reconeix una estructura de cadena de glicosil específica, Man alfa 1-6 (Man alfa 1-3) Man, en la qual almenys un grup hidroxil a la posició C-3 de la manosa enllaçada a C-6 hauria d'estar lliure.